従来の物理的崩壊技術とは異なり、pDNAサンプル中のHCPは高アルカリ性溶液にさらされ、抽出プロセス中に変性します。免疫アッセイによって測定された検出結果に大きな差が生じた。 このキットは、大腸菌K-12株からの残留宿主細胞タンパク質 (HDP) を検出するための二重抗体サンドイッチ技術を使用した固相酵素結合免疫吸着アッセイ (ELISA) に基づいています。 アルカリ溶解によって調製されたE.coli (K-12株) HCPに特異的な羊のポリクローナル抗体をアッセイに使用して、サンプル中の残りのHCPを捕捉した。 抗体被覆率は、現在の主流の方法によって評価される。 キャリブレーション標準とテストサンプルの両方を、アフィニティ精製捕捉抗体でコーティングされたマイクロタイタープレートに同時に追加し、続いてインキュベーションと洗浄を行いました。 ビオチン化抗体をマイクロタイタープレートに添加してHCPに結合し、HRP (西洋ワディッシュペルオキシダーゼ) で標識されたストレプトアビジンと反応させた。 TMB (3,3 ',5,5'-テトラメチルベンジジン) 基質が反応に添加され、HRPはTMBの酸化を触媒しましたH2O2青色の生成物 (655 nmでの最大吸収ピーク) を生成する。 次いで、停止溶液を添加して酵素反応を停止させ、黄色の生成物 (450 nmでの最大吸収ピーク) を得た。 450 nm波長での吸光度値は、キャリブレーション標準およびサンプルのHCP濃度と正の相関関係がありました。 サンプル中のHCPの濃度は、用量反応曲線を使用して計算できます。
| コンポーネント | 配送条件 | 単位サイズ | 検出方法 |
| E.coli HCP-AC校正スタンダード | 2-8 ℃ | 96テスト | サンドイッチELISA |
| Anti-E.coli HCP-AC Microtiterストリップ | |||
| 再構成ソリューション | |||
| 洗浄バッファー濃縮物 (10 ×) | |||
| Anti-E.coli HCP-AC: ビオチン化共役 (20 ×) | |||
| Streptavidin-HRP (100 ×) | |||
| TMB基板 | |||
| ソリューションの停止 | |||
| シーリングフィルム |
| 直線性 & 範囲 | 3 - 729 ng/mL、R2> 0.990 |
| 精度 | 回収率 = 87.1%-106.7% |
| LLOQ | 3 ng/mL |
| LOD | 1.26 ng/mL |
| 精度 | 4.4%-5.9% (CV≤ 15%) |
| 抗体カバレッジ (IMBS-2D) | 70.0%-80.6% |
| 抗体カバレッジ (IMBS-LC/MS) | 85.5% |
| 特異性 | CHO、Vero、HEK293T、Hansenula polymorpha HCPとの交差反応性はありません |
| 丈夫さ | 25 ± 3 ℃ 、CV≤ 15% でインキュベーション |
| Thermo Multiskan FC、Bio-Tek Synergy2マイクロプレートリーダーに限定されない機器の適合性 |
深セン®E.coli (タンパク質発現株) HCP ELISAキット (ワンステップELISA)
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