このキットは、生物学的生成物の下流精製プロセスにおけるブタのトリプシンの定量に適しており、一般的に入手可能な組換えブタのトリプシンおよびブタ膵臓由来のトリプシンを同定することができる。
セリンプロテアーゼであるブタのトリプシンは、リジンとアルギニンのC末端でペプチド結合を特異的に切断します。 これは主に、組換えインスリンの生産、ウイルス粒子の活性化、およびワクチン製造プロセスにおける細胞処理に使用されます。
このキットは、サンプル中の残留トリプシンを検出するための二重抗体サンドイッチ技術を備えた固相酵素結合免疫吸着アッセイ (ELISA) に基づいています。 サンプル中に残っているトリプシンを捕捉するために、トリプシンに特異的なヒツジのポリクローナル抗体をアッセイに用いた。 キャリブレーション標準とテストサンプルの両方を、捕捉抗体で予めコーティングされたマイクロタイタープレートに加えた。 結合していないタンパク質を洗い流した後、検出抗体とビオチン結合抗トリプシン抗体をウェルに加えて複合体を形成しました。 インキュベーションおよび洗浄に続いて、西洋わさびペルオキシダーゼ抱合型ストレプトアビジン (ストレプトアビジン-HRP) を加える。 別のインキュベーションおよび洗浄ステップの後、TMB (3,3 ',5,5'-テトラメチルベンジジン) 基質を反応に添加し、HRPはHによるTMBの酸化を触媒しました2O2青色の生成物 (655 nmでの最大吸収ピーク) を生成する。 次いで、停止溶液を添加して酵素反応を停止させ、黄色の生成物 (450 nmでの最大吸収ピーク) を得た。 450 nm波長での吸光度値は、較正標準およびサンプルにおけるトリプシン濃度と正の相関を示した。 サンプル中のトリプシンの濃度は、用量反応曲線を使用して計算できます。
| コンポーネント | 配送条件 | 単位サイズ | 検出方法 |
| トリプシン校正標準 | 2-8 ℃ | 96テスト | サンドイッチELISA |
| 抗トリプシンマイクロタイターストリップ | |||
| 再構成ソリューション | |||
| 洗浄バッファー濃縮物 (10 ×) | |||
| 抗トリプシン: ビオチン (100 ×) | |||
| Streptavidin-HRP (100 ×) | |||
| TMB基板 | |||
| ソリューションの停止 | |||
| シーリングフィルム |
| 直線性 & 範囲 | 0.04-2.56 ng/mL、R2> 0.990 |
| 精度 | 回収率 = 85.7%-111.0% |
| LLOQ | 0.04 ng/mL |
| ULOQ | 2.56 ng/mL |
| 検出制限 | 0.0144 ng/mL |
| 繰り返し可能性 | 4.1%-7.7% (CV≤ 20%) |
| 特異性 | 一般的なタンパク質類似体との交差反応性はありません (e。g。それぞれ2つの異なるメーカーのオバルブミンとBSA) 、一般的なエンジニアリング細胞株とエンジニアリング細菌タンパク質 (e。g。MDCK、CHO、ベロ、293T、E。coli、およびP。pastoris) |
| 丈夫さ | 25 ℃ ± 5 ℃ 、CV≤ 20% でインキュベーション |
| Thermo Multiskan FC、Bio-Tek Synergy2に限定されない楽器の適合性 |
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