RCR検査とは、CAR-T細胞治療製品の製造中に使用される一連の方法を指し、複製能力レトロウイルス (RCR) または複製能力レンチウイルス (RCL) の存在を検出します。 これらの複製対応ウイルス (RCV) は、ウイルスベクターの可逆変異を介して発生し、複製機能を備えている可能性があるため、患者に安全上のリスクをもたらす可能性があります。 の目的は、RCRテストCAR-Tプロダクトの安全を保障し、RCVの汚染を防ぐことです。
インジケータ細胞栽培方法
この方法では、サンプルをインジケーター細胞と共培養し、細胞変性効果 (CPE) またはウイルス複製の兆候を観察します。 この方法は、RCRの存在を視覚的に検出することができるが、時間がかかる。
ELISA法 (p24タンパク質アッセイ)
この方法は、ウイルスコアタンパク質p24の存在を検出することにより、RCR汚染の存在を判定する。 P24タンパク質は、レトロウイルスおよびレンチウイルスのコアタンパク質であり、その存在は一般にウイルス粒子の存在を示す。
PCR/qPCR法
この方法では、特定のプライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) または定量的PCR (qPCR) を使用して、ウイルスゲノムの特定の領域 (psi-gagまたはVSV-G遺伝子など) を増幅します。RCRの存在を検出する技術。 検出時間が短く、感度が高く、再現性が高いため、qPCR法はCAR-T製品の急速放出試験に広く使用されています。
逆転写酵素活性アッセイ (PERT)
この方法は、逆転写酵素の活性を検出することによってRCRの存在を決定する。 逆転写酵素は、レトロウイルスとレンチウイルスの複製に不可欠な酵素であり、その活性はウイルス複製のマーカーとして役立ちます。
これらの方法の中で、qPCR法は、その効率および感度のために多くのCAR-Tアプリケーション会社によって好まれている。 QPCR法を使用すると、RCRテスト結果を比較的短時間で取得でき、CAR-T製品の安全性と品質を確保できます。
一般に、RCRテストは、CAR-T細胞治療製品の製造プロセスの不可欠な部分であり、製品に複製可能なウイルスが含まれていないことを確認することを目的としています。それにより、治療を受けている患者の二次腫瘍やその他の潜在的な安全性の問題のリスクを減らすことができます。
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