生物学的制品における有害な薬剤の検出

種子ストック、細胞基質、および生物学的製品の製造に使用される原材料に含まれる薬剤汚染物質には、細菌、真菌、マイコプラズマ、マイコバクテリア、およびウイルスが含まれます。 これらの薬剤の効果的な除去または制御は、非特異的かつ特異的な技術によって達成される。

• 非特定の方法は一般に広い検出範囲を提供しますが、動物や培養のテストなど、感度や潜在的な宿主関連の検出の問題に制限がある場合があります。

• 特定の方法は、遺伝子配列のPCRなどの特定の病原体を標的とする。 PCRは高い感度を有するが、その限界は未知の配列に対するプライマーを設計することができないことである。

最大限のバイオセーフティを確保するためには、原材料と出発材料の適切な調達と品質管理、良好な製造慣行 (GMP) の遵守を含む包括的なアプローチに従うことが不可欠です。原則 (環境および人員の監視とプロセス検証を含む) 、および検証のための厳格なテスト。 以下の方法は、一般的に添加剤の検出に使用されます。

1.in Vivoテスト:

1) 試験のために胚化された鶏卵または動物を使用する。

2.in Vitroテスト:

1) 文化方法:

• 異なるメディアまたは寒天を使用する。

2) PCR方法:

• 種特異的ウイルス検出用。

3) 生化学的方法:

• 逆転写酵素のためのPERTのようなアッセイ。

4) 遺伝子シーケンシング:

• 非特異的なウイルスまたは細菌の遺伝子配列。

5) 感染性テスト:

• さまざまなタイプの複製対応ウイルスの指標細胞アッセイ。

6) 伝送电子顕微镜 (TEM):

• 形態学的観察のため。

補助剤の検出方法は、バイオプロセシング段階、サンプルタイプ、および標的微生物によって異なります。 適切な機器と試薬を使用すると、汚染レベルが低くても、信頼性が高く感度の高い検出が保証されます。 不定エージェント検出のための普遍的な方法はありませんが、以下のリストから適切な手法を選択すると、ニーズに最適な方法を見つけるのに役立ちます。

1.ゲノム検出:

• ハイスループットシーケンシングを利用して、生物学的産物のDNAを包括的に配列決定し、データベースと比較して、潜在的な病原体またはその他の外因性DNAを特定します。

2.プロテオミクス検出:

• 質量分析を使用して生物学的製品中のタンパク質を分析し、潜在的な外因性タンパク質を特定します。

3.免疫学的検出:

• 抗体または免疫応答アッセイを使用して生物学的製品の特定の成分を検出し、潜在的な外因性細菌、ウイルス、またはその他の有害物質を特定します。

4.微生物学検出:

• 培養法を使用して微生物を分離および特定し、潜在的な病原体を検出します。

5.分子検出:

• PCRを使用して生物学的生成物中のDNAを検出し、標的の外因性微生物を同定する。

PCRベースの方法は、微生物汚染の高感度かつ迅速な検出または定量化のための最も一般的な分子ベースの技術である。 特定のDNA配列を標的にすることにより、in vitroで培養するのが難しい、または長い栽培期間を必要とするいくつかの特定の種の検出が可能になります。qPCRによるマイコプラズマ種の検出は、細胞および遺伝子治療の製造をサポートする高速QCテストに不可欠です。

10 cfuマイコプラズマqPCR増幅プロット